1) 试剂 所需 2.5%戊二醛、0.1M PH7.35 的磷酸盐缓冲液,注明配制日期及启用日期,置于 4 摄氏度冰箱预冷(2.5%戊二醛预冷至少 1 小时以上;磷酸盐缓冲液不宜长时间预冷,容易结晶)。 2) 仪器与器材 锋利刀片(手术刀片或飞鹰双面刀片)、镊子、低温操作台、1.5mlEP 管、培养皿(或者硬纸卡,盛戊二醛用)、注射器(植物组织用)、冷冻离心机(细菌、细胞、藻类等需要离心的样品使用) " />
生物样品取材基本要求
1. 取材准备
1) 试剂 所需 2.5%戊二醛、0.1M PH7.35 的磷酸盐缓冲液,注明配制日期及启用日期,置于 4 摄氏度冰箱预冷(2.5%戊二醛预冷至少 1 小时以上;磷酸盐缓冲液不宜长时间预冷,容易结晶)。
2) 仪器与器材 锋利刀片(手术刀片或飞鹰双面刀片)、镊子、低温操作台、1.5mlEP 管、培养皿(或者硬纸卡,盛戊二醛用)、注射器(植物组织用)、冷冻离心机(细菌、细胞、藻类等需要离心的样品使用)
2. 取材要求
1) 快
取材动作要迅速,材料离体后 1min 钟内必须进入戊二醛固定液,使组织、细胞尽可能保持原来生活状态,解剖器械要用锋利的刀片(新的手术刀片或飞鹰双面刀片) 划切,避免牵拉或挤压,尽量减少取材中的机械损伤。(动物处死后 5min 内完成此步骤,时间越短越好!)
2) 准
取材要准确
①器官要准确;
②部位要准确:如观察肾脏肾小球或脑神经元需取皮质而不要取髓质, 观察胰岛尽量取胰尾。
③胃肠道、皮肤、角膜、视网膜、耳蜗、骨骼肌等要注意方向性(横切或纵切),取材成条状(0.5mm×1mm×3mm),确保要观察的部位在较长的切面上。
3) 冷
取材过程应在 0~4 摄氏度的操作台上操作(或者是冰上操作,但要注意切勿使组织直接接触或贴近冰面,需要以操作面板隔离,以免操作时间过长而造成组织结冰出现冰晶损伤),所有器械、容器、2.5%戊二醛、PBS 需 4℃预冷足够长的时间。
4) 小
不定位组织大小为 1mm×1mm×1mm(尽可能小,可以更小为 0.5mm×0.5mm× 1mm,越薄越好),如肝、肺、脾等不需要看特定结构的非定位器官组织;定位组织如神经、骨骼肌、肾、脑、肠、血管、胰岛等组织取材大小为 0.5mm×1mm×3mm 的长条状(越薄越好)。
备注:生物样品运输基本要求
用封口膜将 1.5mlEP 管管盖再次封好,做好标记,填好送样申请单(必须填,随样品寄出纸质版申请单)。随后插在海绵板或可以减震的塑料上,用废旧报纸包裹,放入 1~2 个冰袋,样品尽可能远离冰袋固定放置,以防样品出现冰晶损伤。寄出。